De 24 uur van Daytona 2016 (officieel de 54th Rolex 24 at Daytona) was de 54e editie van deze endurancerace. De race werd verreden op 30 en 31 januari 2016 op de Daytona International Speedway nabij Daytona Beach, Florida.
De race werd gewonnen door de Tequila Patrón ESM #2 van Scott Sharp, Ed Brown, Johannes van Overbeek en Pipo Derani. Voor Sharp was het zijn tweede Daytona-zege, terwijl Brown, Van Overbeek en Derani hun eerste overwinning in de race behaalden. De PC-klasse werd gewonnen door de JDC-Miller MotorSports #85 van Chris Miller, Misha Goikhberg, Stephen Simpson en Kenton Koch. De GTLM-klasse werd gewonnen door de Corvette Racing #4 van Oliver Gavin, Tommy Milner en Marcel Fässler. De GTD-klasse werd gewonnen door de Magnus Racing #44 van John Potter, Andy Lally, Marco Seefried en René Rast.
